Bojātu peļu kaulu ekstraktu ietekme uz MG63 un NIH3T3 šūnu augšanas ātrumu un metabolisko aktivitāti.

Abstract

Kaula dzīšana ir dabisks process, ko nodrošina vairāku šūnu koordinētā darbība. Nereti dzīšanas process tiek traucēts, no kā daļa lūzumu dzīst lēnāk vai nesadzīst vispār. Organisma šūnu savstarpējā komunikācija nodrošina kaula dzīšanu. Mērķis ir noskaidrot kaulu lūzuma marķieru lomu šūnu proliferācijā un metabolajā aktivitātē. Bojāti peļu kauli tika ekstrahēti un to ekstrakti tika pievienoti MG63 un NIH3T3 šūnām, lai noskaidrotu, kā ekstrakti ietekmē šūnu augšanas ātrumu un metabolo aktivitāti. Tika veikta šūnu skaitīšana un MTT analīze pēc vienas, trim un septiņām dienām. Lielā apakšstilba ekstrakts palielināja MG63 šūnu skaitu lauciņā par 38 ± 22% (p<0,05) pēc trim dienām un par 100 ± 48% (p<0,01) pēc septiņām dienām. Trīs no četriem bojātu kaulu ekstraktiem palielināja MG63 šūnu augšanas ātrumu. Lielā apakšstilba ekstrakts palielināja šūnu augšanas ātrumu salīdzinājumā ar kontroli par 34 ± 10% (p<0,0001), salauztā lielā apakšstilba ekstrakts – par 38 ± 10% (p<0,0001), turpretim augšstilba ekstrakts – par 13 ± 11% (p<0,05). Bojāto kaulu ekstrakti neietekmēja MG63 šūnu metabolo aktivitāti septiņu dienu laikā. Pēc vienas dienas augšstilba un salauztā augšstilba ekstrakti palielināja NIH3T3 šūnu skaitu par 74 ± 30% (p<0,01) un par 39 ± 27% (p<0,05) salīdzinājumā ar kontroles grupu. Augšstilba ekstrakts samazināja šūnu skaitu par 16 ± 15% (p<0,05) pēc trim dienām, bet lielā apakšstilba ekstrakts samazināja šūnu skaitu par 18 ± 14% (p<0,01) pēc septiņām dienām. Pēc pirmās dienas lielā apakšstilba ekstrakts palielināja NIH3T3 šūnu metabolo aktivitāti par 74 ± 28% (p<0,05), bet salauzts lielā apakšstilba ekstrakts – par 96 ± 26% (p<0,01) salīdzinājumā ar kontroles grupu. Tomēr pēc trim un septiņām dienām netika konstatētas atšķirības starp eksperimentālajām grupām un kontroli. Novērotās NIH3T3 šūnu skaita izmaiņas pēc trim dienām liecina, ka šūnas sasniegušas pārāk augstu konfluenci visos lauciņos.

Bone fracture healing is a natural process which is coordinated by the work of cells in human body. If this process is affected, it can lead to slower and even incomplete healing of some fractures. The interrelated communication of cells in the organism ensure the recovery process of fractured bones. The goal is to ascertain the role of the fractured bone markers to the cell proliferation and metabolic activity. Damaged murine bones were extracted and added to MG63 and NIH3T3 cells to describe the influence of extracts on cell proliferation and metabolic activity. Cells were counted and analyzed with MTT assay after one, three and seven days. Addition of extracts from tibia increased the number of cells by 38 ± 22% (p<0,05) after three days and by 100 ± 48% (p<0,01) after seven days. Three out of four extracts from damaged bones increased MG63 cell proliferation in comparison with the control group. Tibia extracts increased the number of cells by 34 ± 10% (p<0,001) per well, fractured tibia extracts increased the number of cells by 38 ± 10% (p<0,0001), whereas femur extracts – by 13 ± 11% (p<0,05). Damaged murine bone extracts did not have a statistically significant impact on cell metabolic activity during seven days. Extracts from femur and fractured femur increased the number of NIH3T3 cells by 74 ± 30% (p<0,01) and by 39 ± 27% (p<0,05) accordingly after one day in comparison with the control group. Femur extract decreased the number of cells by 16 ± 15% (p<0,05) after three days, but tibia extract decreased the number of cells by 18 ± 14% (p<0,01) after seven days. After one day tibia extract increased metabolic activity of NIH3T3 cells by 74 ± 28% (p<0,05) while fractured tibia extracts increased by 96 ± 26% (p<0,01) in comparison with the control group. However, there is no difference between other impact groups and the control group. Observed NIH3T3 cell proliferation changes at day 3 indicate that all experimental wells have become over confluent.